上海遠慕生物公司為您介紹胎牛血清使用中的常見問題:
一、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
胎牛血清因為其產(chǎn)品的特性,在儲存的時候需要多加注意,錯誤的操作會使胎牛血清失去活性,在實際應用的時候應注意以下幾點:
在解凍和儲存的時候應該將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
二、血清中包含絮狀沉淀該怎么處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。
若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。不使用過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
三、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
1、解凍胎牛血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2、解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
3、請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
4、勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破
壞,從而影響血清的品質(zhì)。
5、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
6、若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
四、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
五、為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養(yǎng)es細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
六、細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
1、細胞生長過老,破碎的細胞殘?。?br /> 2、血清質(zhì)量不好,反復凍融的結(jié)果;
3、配制培養(yǎng)基的ph值偏高,不宜細胞生長;
4、配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;
5、培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。
七、細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?
1、盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
2、培養(yǎng)基無需37℃水浴。
3、培養(yǎng)基保持ph值7.0-7.2。
4、嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。
5、掌握細胞傳代的時機,細胞切勿生長過老。
八、血清保存和使用須注意:
血清應保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時?,應先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應按用量分裝并于-20℃保存,避免反復凍融。