遠(yuǎn)慕闡述:DEAE-纖維素
1 簡(jiǎn)介
DEAE-纖維素,它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物,表面又用大分子糖鏈接枝,使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性,保持更高載量,同時(shí)又具有更好的分辨率。由于比表面積大,平衡和洗脫的時(shí)間也更短。它經(jīng)過(guò)接枝即使是純化病毒,質(zhì)粒等超大分子的物質(zhì),載量基本保持不變。
本產(chǎn)品物理和化學(xué)穩(wěn)定性好,使用壽命長(zhǎng),操作方便。
2 填料特征:
特點(diǎn) 載量大,分辨率好,使用方便。
基質(zhì) 高度交聯(lián)纖維素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附載量 110mg HSA/ml
填料的顆粒大小 50μm
zui大流速 100cm/h
pH范圍 3-10,在位清洗時(shí)pH范圍可到2-11
化學(xué)穩(wěn)定性 各種緩沖液及鹽,0.1M NaOH及醋酸,8M脲,6M鹽酸胍,乙醇,異丙醇等
物理穩(wěn)定性 0.1M中性緩沖液中,120℃30min
保存溫度 +4~30℃
保存 干粉
3 應(yīng)用的注意事項(xiàng):
3.1 色譜柱裝填
(1)所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣,液體做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時(shí)裝柱即可,如果不好溶脹,可適當(dāng)加熱。
(2)在柱子下端加入20%乙醇,以除去柱子中的空氣,關(guān)閉柱子出口,在柱內(nèi)保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易產(chǎn)生氣泡,可以在里面加1%吐溫避免氣泡產(chǎn)生。也可以換成純水裝柱子,但是需要把填料中的20%乙醇也換成純水,具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進(jìn)行,也可以小心傾去填料上的20%乙醇,再換成5倍體積的純水,反復(fù)沉淀去上清,5次左右就可以用于裝柱子。
(3)此填料顆粒比較細(xì),所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網(wǎng),不能漏,也可以取點(diǎn)填料加到篩網(wǎng)上試試,如果沒(méi)有問(wèn)題再將填料連續(xù)倒入柱子時(shí),要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流,以減少氣泡的產(chǎn)生,讓填料先自然沉降到填料體積不再變化,而填料和上面的液體很好分層,上層溶液*澄清,就可以開(kāi)泵用適當(dāng)?shù)牧魉賶褐?,填料體積不再變化后,再把轉(zhuǎn)換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。
(4)在裝柱子前,填料從冰箱中取出至少要室溫放置2-3個(gè)小時(shí),這樣避免裝柱子時(shí)由于溫度變化而使柱子中產(chǎn)生氣泡。
3.2 蛋白的結(jié)合
樣品的鹽濃度和pH要盡量和平衡柱子的緩沖液一致,鹽濃度過(guò)高或者pH帶低也許掛不上,所以要根據(jù)自己的樣品做適當(dāng)調(diào)整。
3.3 蛋白的洗脫
這個(gè)填料如果采用線性梯度洗脫,柱子的直徑和高度比是大于10,數(shù)值越大越有利于分離,而且樣品別上太多,可以按約10mg/ml上樣,如果采用階段洗脫的方法,裝短粗柱子就可以,上樣量也沒(méi)有限制。階段洗脫容易放大,重復(fù)性好,如果洗脫條件好*可以得到和線性梯度一樣或者更好。采用什么方法*根據(jù)自己需要。