培養(yǎng)基傾注溫度小常識

　　1、培養(yǎng)基的傾注適宜溫度約45℃。培養(yǎng)基放置于手心感覺不燙，但是放置于手背感覺燙時，培養(yǎng)基溫度大約就是45℃。培養(yǎng)基傾注時溫度太高的話，凝固時間較長，另外皿蓋上會有大量冷凝水，不利于后續(xù)實驗。溫度太低則容易出現(xiàn)倒板過程中瓶中培養(yǎng)基部分凝固的現(xiàn)象。

　　2、有些培養(yǎng)基需要加入添加成分，這些添加成分在加入前應(yīng)先放置到室溫，避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。

　　3、目前多數(shù)實驗室培養(yǎng)基滅菌后會放置水浴或者烘箱中，需使用的時候拿出來直接倒板。但培養(yǎng)基靜置時間不宜過長，靜置時間一般不超過4小時。靜置時間過長，培養(yǎng)基中瓊脂可能會少量凝固，形成類似絮狀析出。

　　4、在實驗過程中不可避免因特殊情況而導(dǎo)致未倒板培養(yǎng)基已凝固，凝固后培養(yǎng)基可重新加熱溶解。一般來說沸水浴或者電磁爐加熱，不能重新再滅一次菌。

　　培養(yǎng)基的傾倒方法主要涉及以下幾個步驟：

　　1.溫度調(diào)節(jié)。培養(yǎng)基傾注的適宜溫度大約為45℃。如果溫度過高，會導(dǎo)致凝固時間延長，且皿蓋上會有大量冷凝水，不利于后續(xù)實驗。如果溫度過低，則可能導(dǎo)致倒板過程中瓶中培養(yǎng)基部分凝固。

　　2.添加成分。如果培養(yǎng)基需要加入添加成分，這些成分在加入前應(yīng)先放置到室溫，以避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。

　　3.靜置時間。培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)放置在水浴或烘箱中，使用前拿出直接倒板。培養(yǎng)基的靜置時間不宜過長，一般不超過4小時，以避免瓊脂少量凝固。

　　4.平板準(zhǔn)備。倒皿前，平皿應(yīng)保持在35℃~40℃的溫度。如果需要表面接種，有冷凝水的平板表面容易產(chǎn)生蔓延菌落。這時可放在有對流的無菌凈化臺中吹干培養(yǎng)基表面，但不能過度干燥，否則培養(yǎng)過程中平板容易開裂。

　　5.傾注量。平板傾注量一般在18~20mL左右，如果培養(yǎng)時間超過48小時或培養(yǎng)溫度高于40℃，為防止水分過量蒸發(fā)導(dǎo)致平板開裂，傾注量一般為25mL左右。

　　6.避免氣泡。倒平板時盡量貼著平皿壁緩慢倒入，將氣泡留在瓶子底部。如果平板中有少量氣泡的話，可以把氣泡輕搖到平板壁上，這樣不會影響結(jié)果觀察。

　　7.混合均勻。每個平板中加入10mL融化的瓊脂培養(yǎng)基并迅速往復(fù)搖動和轉(zhuǎn)圈晃動5~15次使培養(yǎng)基與接種物充分混合。

　　8.培養(yǎng)。待平板冷卻后翻轉(zhuǎn)并置于適當(dāng)?shù)臏囟认屡囵B(yǎng)。

　　在整個操作過程中，需要注意避免污染，使用前需將裝有培養(yǎng)基的瓶子或試管弄松，然后放在滾水或蒸汽浴里進(jìn)行溶解，要小心避免培養(yǎng)基過熱變質(zhì)。已消毒培養(yǎng)皿的數(shù)量要比所測樣品的數(shù)量多一個做空白對照。