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發(fā)酵過程染菌的防治措施
點擊次數(shù):504 更新時間:2024-02-28

發(fā)酵染菌:指在發(fā)酵過程中生產(chǎn)菌以外的其他微生物侵入了發(fā)酵系統(tǒng),從而使發(fā)酵過程失去真正意義上的純種培養(yǎng)。

染菌對發(fā)酵的影響

一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響

1、青mei素發(fā)酵過程:由于許多雜菌都能產(chǎn)生青mei素酶,因此不管染菌是發(fā)生在發(fā)酵前期、中期或后期,都會使青mei素迅速分解破壞,使目的產(chǎn)物得率降低,危害十分嚴重。

2、核苷或核苷酸發(fā)酵過程:由于所用的生產(chǎn)菌種是多種營養(yǎng)缺陷型微生物,其生長能力差,所需的培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富,因此容易受到雜菌的污染,且染菌后,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分迅速被消耗,嚴重抑制了生產(chǎn)菌的生長和代謝產(chǎn)物的生成。

3、檸檬酸等有機酸發(fā)酵過程:一般在產(chǎn)酸后發(fā)酵液的pH值比較低,雜菌生長十分困難,在發(fā)酵中、后期不太會發(fā)生染菌,主要是要預(yù)防發(fā)酵前期染菌。

4、谷an酸發(fā)酵:周期短,生產(chǎn)菌繁殖快,培養(yǎng)基不太豐富,一般較少污染雜菌,但噬菌體污染對谷an酸發(fā)酵的影響較大。

二、染菌發(fā)生的不同時間對發(fā)酵的影響

1、種子培養(yǎng)期染菌

種子培養(yǎng)主要是使微生物細胞生長與繁殖,此時,微生物菌體濃度低,培養(yǎng)基地營養(yǎng)十分豐富,比較容易染菌。

若將污染的種子帶入發(fā)酵罐,則危害極大,因此應(yīng)嚴格控制種子染菌的發(fā)生。

一旦發(fā)現(xiàn)種子受到雜菌的污染,應(yīng)經(jīng)滅菌后棄去,并對種子罐、管道等進行仔細檢查和徹di滅菌。

2、發(fā)酵前期染菌

在發(fā)酵前期,微生物菌體主要是處于生長、繁殖階段,此時期代謝的產(chǎn)物很少,相對而言這個時期也容易染菌。

染菌后的雜菌將迅速繁殖,與生產(chǎn)菌爭奪培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì),嚴重干擾生產(chǎn)菌的正常生長、繁殖及產(chǎn)物的生成。

3、發(fā)酵中期染菌

發(fā)酵中期染菌將會導(dǎo)致培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)大量消耗,并嚴重干擾生產(chǎn)菌的代謝,影響產(chǎn)物的生成。

有的染菌后雜菌大量繁殖,產(chǎn)生酸性物質(zhì),使pH值下降,糖、氮等的消耗加速;菌體自溶,致使發(fā)酵液發(fā)粘,產(chǎn)生大量的泡沫,代謝產(chǎn)物的積累減少或停止;

有的染菌后會使已生成的產(chǎn)物被利用或破壞。

從目前的情況來看,發(fā)酵中期染菌一般較難挽救,危害性較大,在生產(chǎn)過程中應(yīng)盡力做到早發(fā)現(xiàn)、快處理。

4、發(fā)酵后期染菌

由于發(fā)酵后期培養(yǎng)基中的糖等營養(yǎng)物質(zhì)已接近耗盡,且發(fā)酵的產(chǎn)物也已積累較多,如果染菌量不太多,對發(fā)酵影響相對來說就要小一些,可繼續(xù)進行發(fā)酵。

對發(fā)酵產(chǎn)物來說,發(fā)酵后期染菌對不同的產(chǎn)物的影響也是不同的,如抗生素、檸檬酸的發(fā)酵,染菌對產(chǎn)物的影響不大;肌ji苷酸、谷an酸等地發(fā)酵,后期染菌也會影響產(chǎn)物的產(chǎn)量、提取和產(chǎn)品的質(zhì)量。

發(fā)酵異常現(xiàn)象及原因分析

發(fā)酵過程中的種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?,F(xiàn)象是指發(fā)酵過程中某些物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)或生物參數(shù)發(fā)生與原有規(guī)律不同的改變,這些改變必然影響發(fā)酵水平,使生產(chǎn)蒙受損失。對此應(yīng)及時查明原因,加以解決。

一、種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異常現(xiàn)象

1、種子培養(yǎng)異常(表現(xiàn)為培養(yǎng)的種子質(zhì)量不合格):菌體生長緩慢;菌絲結(jié)團;代謝不正常。

2、發(fā)酵異常:菌體生長差;pH值過高或過低;溶解氧水平異常;泡沫過多;菌體濃度過高或過低;菌體生長差。

二、染菌的檢查和判斷

發(fā)酵過程是否染菌應(yīng)以無菌試驗的結(jié)果為依據(jù)進行判斷。

在發(fā)酵過程中,如何及早發(fā)現(xiàn)雜菌的污染并及時采取措施加以處理,是避免染菌造成嚴重經(jīng)濟損失的重要手段。因此,生產(chǎn)上要求能準確、迅速的檢查出雜菌的污染。

目前常用于檢查是否染菌的無菌試驗方法主要有:顯微鏡檢查法、肉湯培養(yǎng)法、平板(雙碟)培養(yǎng)法、發(fā)酵過程的異常觀察法(如溶氧量)等。

此法檢查雜菌最jian簡單、最直接、最chang用。必要時還可進行芽胞染色或鞭毛染色。

1、顯微鏡檢查法(鏡檢法)

用革蘭氏染色法(Grams stain)對樣品進行涂片、染色,然后在顯微鏡下觀察微生物的形態(tài)特征,根據(jù)生產(chǎn)菌與雜菌的特征進行區(qū)別、判斷是否染菌。如發(fā)現(xiàn)有與生產(chǎn)菌形態(tài)特征不一樣的其它微生物的存在,就可判斷為發(fā)生了染菌。

2、肉湯培養(yǎng)法(用于檢查培養(yǎng)基和無菌空氣是否帶菌,同時此法也可用于噬菌體的檢查)

通常用葡萄糖酚紅肉湯作為培養(yǎng)基,將待測樣品直接接入經(jīng)wan全滅菌后的肉湯培養(yǎng)基中,分別于37℃、27℃進行培養(yǎng),隨時觀察微生物的生長情況,并取樣進行鏡檢,判斷是否有雜菌。

葡萄糖酚紅肉湯培養(yǎng)基配方:0.3%牛肉膏、0.5%葡萄糖、0.5%NaCl、0.8%蛋白胨、0.4%酚紅溶液,pH 7.2。

3、平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法

將待測樣品在無菌平板上劃線,分別于37℃、27℃進行培養(yǎng),一般24h后即可進行鏡檢觀察,檢查是否有雜菌。有時為了提高平板培養(yǎng)法的靈敏度,也可將需要檢查的樣品先置于37℃培養(yǎng)6h,使雜菌迅速增殖后再劃線培養(yǎng)。

4、注意點

無菌試驗時,如果肉湯連續(xù)三次發(fā)生變色反應(yīng)(紅色→黃色)或產(chǎn)生混濁,或平板培養(yǎng)連續(xù)三次發(fā)現(xiàn)有異常菌落的出現(xiàn),即可判斷為染菌;

有時肉湯培養(yǎng)的陽性反應(yīng)不夠明顯,而發(fā)酵樣品的各項參數(shù)確有可疑染菌,并經(jīng)鏡檢等其它方法確認連續(xù)三次樣品有相同類型的異常菌存在,也應(yīng)該判斷為染菌;

一般來講,無菌試驗的肉湯或培養(yǎng)平板應(yīng)保存并觀察至本批(罐)放罐后12h,確認為無雜菌后才能棄去;

無菌試驗期間應(yīng)每6h觀察一次無菌試驗樣品,以便能及早發(fā)現(xiàn)染菌。

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