1.蛋白質(zhì)測(cè)定的Folin-酚比色法(即Lowry法)的定量范圍為5~100μg蛋白質(zhì),靈敏度高;但操作要費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間,且Folin試劑顯色反應(yīng)由酪an酸、色an酸和半胱氨氨酸引起,因此樣品中若含有酚類(lèi)、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用;不同蛋白質(zhì)因酪an酸、色an酸含量不同而使顯色強(qiáng)度也稍有不同。 紫外吸收法測(cè)蛋白質(zhì)含量迅速、簡(jiǎn)便、不消耗樣品,低濃度鹽類(lèi)不干擾測(cè)定。因此,已在蛋白質(zhì)和酶的生化制備中廣泛采用,尤其在柱層析分離純化中,常用280nm進(jìn)行紫外檢測(cè),來(lái)判斷蛋白質(zhì)吸附或洗脫情況。
但該法的缺點(diǎn)是:
(1)對(duì)于測(cè)定那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)中酪an氨酸和色an酸含量差異較大的蛋白質(zhì),有一定的誤差。故該法適于測(cè)定與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)。
(2)若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物質(zhì),會(huì)出現(xiàn)較大干擾。例如,在制備酶的過(guò)程中,層析柱的流出液中有時(shí)混雜有核酸,應(yīng)予以校正
2.當(dāng)樣品中含有核酸類(lèi)雜質(zhì),可以根據(jù)核酸在260nm波長(zhǎng)處有最qiang的紫外光吸收,而蛋白質(zhì)在280nm處有最大的紫外光吸收的性質(zhì),通過(guò)計(jì)算可以適當(dāng)校正核酸對(duì)于測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的干擾作用。但是,因?yàn)椴煌牡鞍踪|(zhì)和核酸的紫外吸收是不相同的,雖然經(jīng)過(guò)校正,測(cè)定結(jié)果還存在著一定的誤差