流動(dòng)相中緩沖鹽的正確使用方法
1、使用前的處理
在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱,直至基線平穩(wěn)。原則上,用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。理由:緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí))流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí),如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對(duì)較小,不先沖洗掉,接下來做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大,而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí),緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出,沉積下來,這將可能導(dǎo)致上述對(duì)色譜柱的損害。
2、使用后的處理
用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析用流動(dòng)相唯1的區(qū)別是,用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min,直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)不使用,要長(zhǎng)期保存,則需再加上一步,即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍,直至基線平穩(wěn)。
使用緩沖液要注意幾點(diǎn)
1、避免使用鹽酸鹽,鹽酸鹽對(duì)鋼質(zhì)有腐蝕作用。
2、緩沖液最好要現(xiàn)配現(xiàn)用,往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液,隔天或放置長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。
3、實(shí)驗(yàn)后不可用有機(jī)溶劑直接過度,有機(jī)溶劑會(huì)處使鹽類析出,造成液路或色譜柱堵塞,可用95:5的水甲醇沖洗。
4、使用緩沖液要及時(shí)掌握ph范圍,做到胸中有數(shù)。
5、清洗液路和柱子時(shí),有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。
6、長(zhǎng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出,若有白色鹽類析出,可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路(拆下柱子,走30ml,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞。
7、選擇緩沖液要用可靠的試劑,避免不純的鹽類造成不必要的麻煩。
如果流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例很高是不能用來沖洗緩沖鹽的,是洗不出來的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇沖洗,是可以把緩沖鹽沖洗出來的,然后用純的有機(jī)溶劑來保護(hù)柱子。最hao的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換,一般在15分鐘以內(nèi)最好,且用0.8的流速較好. 如果用純水沖,容易造成鍵合的碳鏈的流失,最好用5%~10%甲醇水溶液沖??梢杂眉兯媪鲃?dòng)相中的緩沖液,有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。