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昆蟲細胞培養(yǎng)的重要點介紹
點擊次數(shù):331 更新時間:2023-09-05

  細胞培養(yǎng)作為很多實驗的基礎(chǔ),在生物工程領(lǐng)域的重要性不言而喻?,F(xiàn)在,隨著昆蟲桿狀病毒表達載體系統(tǒng)(BEVS)的廣泛應(yīng)用,昆蟲細胞的體外培養(yǎng)也越來越受到重視。從1915年,昆蟲細胞培養(yǎng)起始,經(jīng)過一百多年的發(fā)展,已在細胞、分子、醫(yī)學(xué)等方向廣泛應(yīng)用。目前,常用于培養(yǎng)的昆蟲細胞以草地貪夜蛾細胞株Sf9和Sf21,以及粉紋夜蛾細胞株Tn5B1-4(商品名High Five)為主。

  下面遠慕以Sf9為例,具體講解一下昆蟲細胞培養(yǎng)的要點:

  細胞基本信息:

  Sf9昆蟲細胞系來自雌性草地貪夜蛾卵巢組織,是利用桿狀病毒表達系統(tǒng)進行重組蛋白表達的合適宿主。雖然以往人們利用由培養(yǎng)瓶和含血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成的靜止培養(yǎng)系統(tǒng)進行昆蟲細胞的培養(yǎng),但是一般而言昆蟲細胞并無貼壁依賴性,更適于進行懸浮培養(yǎng)。

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  細胞特性:

  (1)細胞靜置培養(yǎng)時半貼壁生長,也可以使用搖瓶懸浮培養(yǎng);

  靜置培養(yǎng)時細胞會大量附著瓶底生長,呈半貼壁狀態(tài),會有少部分細胞懸浮生長;搖瓶培養(yǎng)時可以很快適應(yīng)懸浮生長,呈單個或小聚團懸浮生長。

 ?。?)對溫度極為敏感;

  細胞需盡量控制在26~28℃培養(yǎng),以保證細胞生長狀態(tài);若溫度低于26℃,細胞生長速度會變慢,但恢復(fù)溫度后生長速度會逐漸恢復(fù),不會對細胞產(chǎn)生過大傷害;若溫度28℃~30℃,細胞生長嚴(yán)重受限;若溫度高于30℃,細胞將受到不可逆?zhèn)?,即使溫度恢?fù)也無法恢復(fù)正常生長狀態(tài);同時注意使用的培養(yǎng)基、PBS及其他試劑應(yīng)保持室溫(最好26~28℃),另外盡量減少觀察細胞次數(shù)和時間。

  (3)細胞可以適應(yīng)多種培養(yǎng)體系。

  該細胞多用于真核細胞蛋白表達系統(tǒng),因此針對該細胞有諸多培養(yǎng)體系,例如Grace's Insect Medium、SF900 II、TNM-FH、ESF921等培養(yǎng)體系,包括含血清的培養(yǎng)體系和不含血清的培養(yǎng)體系,可以根據(jù)自身實驗需要選擇逐步更換為合適的培養(yǎng)體系。

  昆蟲細胞培養(yǎng)注意事項:

  昆蟲細胞傳代/凍存/復(fù)蘇的一般步驟與哺乳動物細胞相同,但有些關(guān)鍵點又有所不同。

  (1)昆蟲細胞應(yīng)于28°C、非濕化環(huán)境中培養(yǎng)。培養(yǎng)昆蟲細胞時建議不要進行CO2交換,所以培養(yǎng)瓶選擇密閉蓋;

  (2)使用昆蟲細胞專用的培養(yǎng)基;

 ?。?)貼壁昆蟲細胞:細胞密度低于匯合狀態(tài)的20%時,細胞生長會受到抑制。健康狀態(tài)最hao的細胞是對數(shù)期收獲的細胞,故昆蟲細胞應(yīng)在對數(shù)期傳代。但是,如果培養(yǎng)的是強貼壁性昆蟲細胞,則應(yīng)在細胞達到匯合狀態(tài)或者剛剛開始從培養(yǎng)瓶底部脫離時進行傳代,因為此時細胞容易脫離;

 ?。?)某些昆蟲細胞系可能需要一定的過程來適應(yīng)懸浮培養(yǎng)。進行細胞懸浮培養(yǎng)時無需更換培養(yǎng)基。定期傳代時需要吸出細胞懸液,然后加入適量培養(yǎng)基,將細胞稀釋到適當(dāng)?shù)拿芏?。添加新鮮培養(yǎng)基后可使細胞營養(yǎng)素達到wan全補充;

 ?。?)貼壁昆蟲細胞在無血清培養(yǎng)條件下,昆蟲細胞與基質(zhì)貼附極為牢固,需要花費較大力氣才能使其脫落。要使細胞脫落,最佳的方法是蓋緊瓶蓋,并以瓶蓋朝上的方向抓住培養(yǎng)瓶,在臺面上以中等力量敲擊瓶底2~3次,這樣將會有足夠的細胞解離下來用于傳代。

  注意:

  千萬不要劇烈搖晃培養(yǎng)瓶,昆蟲細胞對吹打、氣泡等機械損傷非常敏感,若吹打力度過大、氣泡過多將嚴(yán)重影響細胞生長狀態(tài),甚至造成細胞損傷。

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