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蛋白酶抑制劑混合物使用方法
點擊次數(shù):623 更新時間:2023-08-10

蛋白酶抑制劑混合物(100×,哺乳動物樣品提取用)

規(guī)格:1ml /5×1ml

儲存條件:-20℃保存,有效期一年。

產(chǎn)品簡介

蛋白酶抑制劑混合物(哺乳動物樣品抽提用, 100×)  (Protease  inhibitor cocktail  for mammalian cell and tissue extracts, 100×) 是一種用于哺乳動物細(xì)胞或組織蛋白提取的蛋白酶抑制劑混合物(100mMAEBSF,  80μM  Aprotinin,5mMBestatin,1.5mME64,2mMLeupeptin and1mMPepstatin A in DMSO),并提供獨立包裝的0.5MEDTA。

哺乳動物細(xì)胞或組織提取物中含有許多內(nèi)源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易導(dǎo)致提取物中的蛋白降解或去修飾,從而影響后續(xù)的蛋白檢測。因此在提取物中添加適當(dāng)?shù)牡鞍酌?、磷酸酶等抑制劑是防止蛋白降解和去修飾的有效方法?br/>
本產(chǎn)品為經(jīng)優(yōu)化和測試的用于哺乳動物細(xì)胞或組織蛋白提取的蛋白酶抑制劑混合物,包含了廣譜的絲氨an酸、半胱an氨酸和酸性蛋白酶抑制劑、以及氨基肽酶抑制劑。

本產(chǎn)品使用便捷,通常以1:100的比例分別把蛋白酶抑制劑混合物和0.5MEDTA加入裂解液中,如用于檢測金屬蛋白酶活性,則不宜添加EDTA。

本產(chǎn)品可以有效抑制哺乳動物細(xì)胞或組織提取物中的各種蛋白酶活性,如絲氨an酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨an酸蛋白酶、蘇氨an酸和天冬氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶等。其中AEBSF是一種水溶性的絲氨an酸蛋白酶不可逆抑制劑,其抑制常數(shù)與PMSF和DFP的抑制常數(shù)相似,可以有效抑制胰yi蛋白酶(trypsin)、糜mi蛋白酶(chymotrypsin)、纖溶酶(plasmin)、激肽釋放mei酶(kallikrein)和凝ning血酶(thrombin)等蛋白酶,作為PMSF和DFP的替代物,AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液穩(wěn)定性更好。Aprotinin是絲氨an酸蛋白酶的競爭性可逆抑制劑;Bestatin是氨基肽酶可逆抑制劑;E64是半胱氨an酸蛋白酶不可逆抑制劑;Leupeptin是絲an氨酸和半胱an氨酸蛋白酶可逆抑制劑;Pepstatin A是天冬氨酸蛋白酶可逆抑制劑;EDTA作為螯合劑是金屬蛋白酶的可逆抑制劑。

一個包裝的本產(chǎn)品通常足夠用于100ml裂解液的配制。

使用方法:

1.本蛋白酶抑制劑混合物為100×的儲存液,使用時按照1:100的比例加入到裂解液中(例如,1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物),混勻后即可使用。根據(jù)需要,0.5M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中(如用于檢測金屬蛋白酶活性,則不宜添加EDTA)。含有蛋白酶抑制劑混合物的裂解液宜現(xiàn)用現(xiàn)配,不宜配制后凍存待后續(xù)使用。

2. 待所需的抑制劑添加完畢混勻后,就可以開始進(jìn)行哺乳動物組織的裂解和蛋白提取。提示:蛋白酶抑制劑混合物盡量避免反復(fù)凍融,第一次使用后,可按照每次使用量分裝凍存。family:Arial'>1:100的比例加入到裂解液中。

3. 待所需的抑制劑添加完畢混勻后,就可以開始進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞或組織的裂解和蛋白提取。提示:蛋白酶抑制劑混合物盡量避免反復(fù)凍融,第一次使用后,可按照每次使用量分裝凍存。

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