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瓊脂糖凝膠6B說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):1789 更新時(shí)間:2018-03-01

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瓊脂糖凝膠6B參數(shù)說(shuō)明

中文名:瓊脂糖凝膠6B

英文名:Sepharose 6B

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

基質(zhì):6%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠

規(guī)格:5g

操作溫度:4-40℃

zui大流速:300cm/h

性狀:白色膠體

保存溫度:4-8℃

瓊脂糖凝膠6B分離范圍:10,000-4 ×106

類(lèi)型:凝膠過(guò)濾填料,凝膠層析介質(zhì)

用途:親和層析介質(zhì)

應(yīng)用:蛋白、多肽、多糖的分離、分子量測(cè)定等

瓊脂糖凝膠6B說(shuō)明書(shū)

瓊脂糖凝膠6B

   

瓊脂糖凝膠6B操作步驟

 該環(huán)氧活化瓊脂糖凝膠介質(zhì)可以和含有氨基、巰基或羥基的親和配基的蛋白質(zhì)、多肽、糖等物質(zhì)偶聯(lián)。具體的偶聯(lián)方法如下(偶聯(lián)BSA為例):

洗滌:用10-20倍膠體積的去離子水沖洗保存存儲(chǔ)液中的環(huán)氧活化膠,除去存儲(chǔ)液,抽干;

偶聯(lián):稱(chēng)取200mg BSA,溶于10ml 0.1M pH 9.0碳酸鈉緩沖液,加入到洗滌抽干的活化膠中,在37℃搖床上振蕩12-24h偶聯(lián),偶聯(lián)完畢后將料液轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干;

封閉:將抽干的偶聯(lián)BSA的膠加入到100 ml三角瓶中,加入30 ml 1 mol/L乙醇胺溶液。攪拌速度120 rpm,37 ℃條件下反應(yīng)4h,然后將料液轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干。

清洗:然后依次用5倍的去離子水、0.1 M含0.5M NaCl的乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH 4.0)、去離子水、0.1M含0.5M NaCl的硼酸-四硼酸鈉緩沖液(pH 8.0)和去離子水充分洗滌后,抽干。

保存:保存于4℃、20%乙醇溶液中。

 

瓊脂糖凝膠6B注意事項(xiàng)

1、不同配基的偶聯(lián)方法與上面類(lèi)似,但是反應(yīng)的條件例如:配基加入量,反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)溫度應(yīng)根據(jù)配基的不同進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整;

2、可用碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液做為偶聯(lián)緩沖液,但不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的緩沖液。

 

瓊脂糖凝膠6B分離技巧:

1、分離時(shí)流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達(dá);接餾分時(shí)可開(kāi)全速,節(jié)省時(shí)間。

2、柱子盡可能長(zhǎng),葡聚糖凝膠柱長(zhǎng)的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢(shì)兵力,打擊敵人。

3、餾分一定要接的細(xì),可1/10,或1/20 個(gè)保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積,對(duì)特殊保留強(qiáng)的化合物,可洗脫5個(gè)保留體積。

5、鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)

6、葡聚糖凝膠對(duì)黃酮類(lèi)成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻(xiàn)參考。

7、填料反復(fù)使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來(lái),待用。暫時(shí)不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長(zhǎng)期不用時(shí),可在以上處理基礎(chǔ)上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無(wú)醚味后,60~80°C干燥后保存。

 

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標(biāo)簽:瓊脂糖凝膠6B

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