上海遠(yuǎn)慕生物專(zhuān)業(yè)供應(yīng)進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒，質(zhì)粒小量提取試劑盒Plasmid Mini Kit I(5)，質(zhì)粒小量提取試劑盒I型，質(zhì)粒小量提取試劑盒II型，其他型號(hào)等，質(zhì)粒載體，動(dòng)物血清血漿，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品，抗生素，生物分子，微生物，培養(yǎng)基，緩沖液，蛋白質(zhì)，抗體，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，酶，通用試劑，化學(xué)試劑，生化試劑，其他科研試劑等，提供ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，品種齊全，咨詢(xún)！
中文名：質(zhì)粒小量提取試劑盒
型號(hào)：Plasmid Mini Kit I(5)
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
系列：質(zhì)粒小量提取試劑盒I型
質(zhì)粒提取試劑盒系列分類(lèi)：
質(zhì)粒小量提取試劑盒
質(zhì)粒小量提取試劑盒 II型
質(zhì)粒中量提取試劑盒
質(zhì)粒大量提取試劑盒
快速過(guò)濾超大量質(zhì)粒提取試劑盒
宏量質(zhì)粒提取試劑盒
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質(zhì)粒快速大量提取試劑盒
酵母質(zhì)粒提取試劑盒
96孔板快速過(guò)濾質(zhì)粒提取試劑盒
溫馨提示：更多系列分類(lèi)請(qǐng)遠(yuǎn)慕生物銷(xiāo)售人員！
質(zhì)粒小量提取試劑盒Plasmid Mini Kit I(5)詳細(xì)介紹：
從10-15ml過(guò)夜培養(yǎng)的菌液中純化高達(dá)70µg質(zhì)粒DNA
該試劑盒專(zhuān)門(mén)為提供較大量的質(zhì)粒而設(shè)計(jì)，硅膠柱結(jié)合質(zhì)粒能力是I型的兩倍。適合于從5-15ml培養(yǎng)過(guò)夜的細(xì)菌培養(yǎng)液中抽提高達(dá)70µg的質(zhì)粒DNA，*小量抽提與中量抽提之間的空白。純化的質(zhì)?？梢灾苯佑糜谧詣?dòng)測(cè)序、限制性?xún)?nèi)切酶酶切以及PCR 、標(biāo)記以及體外轉(zhuǎn)錄等實(shí)驗(yàn)。
質(zhì)粒小量提取試劑盒Plasmid Mini Kit I(5)特性與優(yōu)點(diǎn)：
安全－無(wú)酚等危險(xiǎn)的有機(jī)物抽提
可靠－操作簡(jiǎn)單，每次都能獲得理想的效果
快速－可在35分鐘內(nèi)完成一次抽提工作
方便－用小型柱就可以獲得較大量的質(zhì)粒DNA
質(zhì)粒小量提取試劑盒操作流程：
1.取過(guò)夜菌1.5毫升，5000g離心1分鐘收集細(xì)菌沉淀，棄上清。再重復(fù)一次，每管共收集3毫升過(guò)夜菌沉淀。通常大腸桿菌宜用LB培養(yǎng)過(guò)夜（16小時(shí)左右）至OD值為2-4。建議5000g（通常為5000rpm左右）室溫離心1分鐘，如沉淀不充分則適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或離心速度過(guò)快會(huì)使沉淀過(guò)于緊密，不利于加入溶液I后散開(kāi)沉淀。直接倒掉上清，再倒入約1.5毫升菌液并重復(fù)上述操作，然后倒置于吸水紙上（可用普通草紙），使液體流盡。如果細(xì)菌密度明顯偏低，可考慮使用更多菌液，再重復(fù)上述操作1-2次。對(duì)于高拷貝質(zhì)粒所用菌量一般不能超過(guò)5毫升，對(duì)于低拷貝質(zhì)粒所用菌量一般不能超過(guò)10毫升。過(guò)量的細(xì)菌會(huì)導(dǎo)致后續(xù)的裂解不充分。
2.每管加入250微升溶液I，重懸細(xì)菌沉淀。確保沉淀*散開(kāi)，無(wú)可見(jiàn)細(xì)菌團(tuán)塊。確認(rèn)溶液I中已經(jīng)添加了RNase A。速度vortex 5-10秒或更長(zhǎng)時(shí)間，懸起沉淀。一定要充分混勻，對(duì)著光亮處觀(guān)察應(yīng)呈
均勻的懸濁液，無(wú)明顯細(xì)菌團(tuán)塊或絮塊。如果沒(méi)有vortex，可以用槍吹打沉淀使沉淀逐漸散開(kāi)或用手指把沉淀彈開(kāi)。
3.每管加入250微升溶液II，輕輕顛倒離心管4-6次，使細(xì)菌*裂解，溶液透明。切勿vortex！vortex或其它劇烈操作會(huì)導(dǎo)致基因組DNA斷裂，易導(dǎo)致*終所得質(zhì)粒被基因組DNA污染。顛倒4-6次后，溶液應(yīng)變得透明，無(wú)團(tuán)塊或絮狀物。如果加入溶液I后細(xì)菌沒(méi)有*散開(kāi)，那么顛倒4-6次后，可能還會(huì)有團(tuán)塊或絮狀物。遇到有少量團(tuán)塊或絮狀物產(chǎn)生的情況，可以增加顛倒次數(shù)3-5次，再室溫放置2-3分鐘，但總裂解時(shí)間不可超過(guò)5分鐘。
4.每管加入350微升溶液III，隨即顛倒離心管4-6次混勻，可見(jiàn)白色絮狀物產(chǎn)生。切勿vortex！顛倒次數(shù)也不宜過(guò)多，否則易導(dǎo)致*終所得質(zhì)粒的質(zhì)量下降。
5.速（13,000rpm左右）室溫離心10分鐘。離心后會(huì)產(chǎn)生白色沉淀。離心時(shí)準(zhǔn)備好下一步需使用的質(zhì)粒純化柱，廢液收集管，并在純化柱上做好標(biāo)記。
6.將上一步驟離心后的上清倒入或吸入到質(zhì)粒純化柱內(nèi)。速離心30-60秒，倒棄收集管內(nèi)液體。質(zhì)粒倒入質(zhì)粒純化柱后，可以不用等待，直接離心。倒棄收集管內(nèi)的液體后，保留收集管繼續(xù)使用。
7.在質(zhì)粒純化柱內(nèi)加入750微升溶液IV，速離心30-60秒，洗去雜質(zhì)，倒棄收集管內(nèi)液體。加入溶液IV后可以不用等待，直接離心。倒棄收集管內(nèi)的液體后，保留收集管繼續(xù)使用。
8.速再離心1分鐘，除去殘留液體并使痕量乙醇*揮發(fā)。注意：倒棄收集管內(nèi)液體后再離心，才能*去除微量的溶液IV。微量的溶液IV會(huì)影響質(zhì)粒的質(zhì)量。
9.將質(zhì)粒純化柱置于1.5毫升離心管上，加入50微升溶液V至管內(nèi)柱面上，放置1分鐘。溶液 V 需要直接加至管內(nèi)柱面中央，使液體被純化柱吸收。如果不慎將溶液 V 沾在管壁上，一定要震動(dòng)管子，使液體滑落到管底，以便被純化柱吸收。也可以用重蒸水或 MiliQ 級(jí)純水替代溶液 V，但是水的 pH 應(yīng)不小于 6.5。溶液 V 加入后放置時(shí)間稍長(zhǎng)，對(duì)于增加質(zhì)粒產(chǎn)量會(huì)略有幫助。
10. 速離心1分鐘，所得液體即為高純度質(zhì)粒。通常所得質(zhì)粒濃度為0.1-0.3mg/ml左右。如果想得到高濃度的質(zhì)粒，可以采用常規(guī)的乙醇沉淀方法濃縮質(zhì)粒。
標(biāo)簽：質(zhì)粒小量提取試劑盒Plasmid Mini Kit I(5) 質(zhì)粒小量提取試劑盒 質(zhì)粒提取試劑盒 質(zhì)粒小量提取試劑盒I型 Plasmid Mini Kit I(5)
